Съдържание
- Основна разлика
- Южно петно срещу. Западно Блотинг
- Сравнителна диаграма
- Какво е Южното петно?
- Какво е Western Blotting?
- Ключови разлики
- заключение
Основна разлика
Основната разлика между Southern Blotting и Western Blotting е, че Southern Blotting е техника, която се използва за откриване на специфичен фрагмент на ДНК в дадена проба, докато Western Blotting се използва за откриване на специфичен протеин в дадена проба.
Южно петно срещу. Западно Блотинг
Блотирането е техника, която се използва от учените за разделяне на различни видове молекули от смес или проба. При тази техника макромолекули като нуклеинови киселини (ДНК и РНК) и протеини в смес се движат през плоча от гел. Тук минутните частици ще се движат по-бързо от по-големите. Тези молекули се притискат към повърхността на имобилизирана мембрана, която пренася молекулите върху мембраната. Има различни видове попиване на базата на откриване на специфичен материал, т.е. южно петно, северно петно и западно петно. Южното блотиране е типът блотинг, който се използва за откриване на ДНК, докато западното блотиране се използва за откриване на протеин. Южното попиване е разработено от Едуард М. Саузерн през 1975 г. И така, то е известно като Южно петно. От друга страна, западното петно е разработено от групата на Джордж Старк в университета в Станфорд през 1979 г. Това име е използвано за съвпадение с южното петно. Ютното блотиране се използва за намиране на специфична последователност на ДНК, докато западното блотиране се използва за откриване на специфична аминокиселина или протеинова последователност.
Сравнителна диаграма
| Южно петно | Западно Блотинг |
| Техника, която се използва за откриване на специфична последователност на ДНК в дадена смес, е известна като южно петно. | Техника, която се използва за откриване на специфична последователност на аминокиселини на протеина в дадена смес, е известна като южно блотиране. |
| Разработено от | |
| Южното попиване е разработено от Едуард М. Саузер през 1975г. | Западното петно е разработено от групата на Джордж Старк в университета в Станфорд през 1979 г. |
| Тип на откриване | |
| Ютното попиване се използва за намиране на специфична последователност на ДНК. | Западното блотиране се използва за откриване на специфична аминокиселина или протеинова последователност. |
| принцип | |
| Работи на принципа на хибридизацията. | Той работи на принципа на имунодетекционния метод или взаимодействието антиген-антитяло. |
| сонда | |
| Едноверижна ДНК или понякога РНК се използва като сонда. | Първичните и вторичните антитела се използват като сонда. |
| Гел електрофореза | |
| Агарозната гел електрофореза се използва при Южно блотиране. | SDS PAGE / Полиакриламиден гел, използван за отделяне на протеини при западно блотиране |
| Процедура за изтриване | |
| Ютното попиване следва процедурата на капилярен трансфер. | Western Blotting следва електрическа процедура за трансфер. |
| проба | |
| По време на Южното попиване пробата трябва да бъде денатурирана. | По време на западното блотиране, пробата трябва да бъде в родното си състояние. |
| Блокирането | |
| Никоя стъпка като блокиране не е замесена в южното заливане. | По време на западното блотиране неспецифичните антитела се блокират върху нитроцелулозната хартия с помощта на мляко на прах или говежди серумен албумин (BSA). |
| Методи за етикетиране | |
| Най-често срещаните методи за етикетиране, които се използват при южно замазване, са използването на хромогенни багрила или радиомаркиране или флуоресцентно етикетиране и др. | Методите за етикетиране, използвани при западно блотиране, са използването на флуоресцентно маркирано антитяло или радиомаркиране, хромогенни багрила или образуване на диаминобензидин и др. |
| Методи за откриване | |
| Откриването на светлина, авторадиографията и промените в цвета се използват като методи за откриване при южно петно. | Методите за откриване при запазване на петна са промени в цвета и откриване на светлина и т.н. |
| Приложение | |
| Южното блотиране се използва при откриване на ДНК, тестване на бащинство, фиксиране на ДНК, за идентификация на жертви, за идентифициране на престъпници, за намиране на инфекциозни агенти и за идентифициране на мутация или пренареждане на гени и др. | Western blotting се използва за намиране на броя на протеини в смес, за откриване на наличие на ХИВ, вирус и бактерии и др. В серума, за откриване на дефектни протеини и се използва като определена мярка за херпес, хепатит В, Лайм болест и болест на Кройцфелд-Яков и т.н. |
Какво е Южното петно?
Южното попиване е най-старият метод на блотиране, който е даден от Едвин Саузер, наречен по този начин като южно петно. Използва се за намиране на специфична последователност на ДНК в дадена проба или смес. Стъпките, които участват по време на южното блотиране, са електрофореза, трансфер и откриване на специфични последователности. На първо място, ДНК се фрагментира с помощта на специфичен рестрикционен ензим. След това желаните ДНК фрагменти се разделят чрез гел електрофореза. Тези фрагменти се денатурират с помощта на алкален разтвор, например, NaOH и др., За да се разделят двете ДНК вериги. Тези едноверижни ДНК фрагменти след това се прехвърлят върху мембрана чрез процеса на блотиране. Тази свързана с мембрана ДНК след това се третира с белязана сонда. Тази сонда ще се прикрепи към нейната допълваща верига върху мембранната ДНК, която може да се визуализира с авторадиограма и т.н.
Какво е Western Blotting?
Методът на западно блотиране е изобретен от групата на Джордж Старк в Станфордския университет, който се използва за идентифициране на специфична последователност на аминокиселини в протеина. Известен е още като протеин блот или блокаж на имунитета. Стъпките по време на западното блотиране са електрофореза, трансфер и откриване на специфични протеини. На първо място, хомогенизирайте сместа. След това отделете интересуващата молекула с помощта на електрофореза. Прехвърлете тези молекули върху мембраната и идентифицирайте специфичния протеин, като използвате специфична сонда.
Ключови разлики
- Техника, която се използва за намиране на специфична последователност на ДНК в дадена смес, е известна като южно блотиране, докато техниката, която се използва за откриване на специфична последователност на аминокиселини на протеина в дадена смес, е известна като южно блотиране.
- Южното попиване е разработено от Едуард М. Саузер през 1975 г., така известно като южно петно. От друга страна, Western blot е разработена от групата на Джордж Старк в университета в Станфорд през 1979 г.
- Ютното попиване се използва за намиране на специфична последователност на ДНК. Обратно, Western blot се използва за намиране на специфична аминокиселина или протеинова последователност.
- Ютното попиване работи на принципа на хибридизация от обратната страна; Western blotting работи на принципа на метода на имунодетекцията или взаимодействието антиген-антитяло.
- Едноверижна ДНК или понякога РНК се използва като сонда при Южно блотиране от другата страна, при западно блотиране първичните и вторичните антитела се използват като сонда.
- Електрофорезата с агарозен гел се използва при южно блотиране, докато SDS PAGE / полиакриламиден гел се използва за отделяне на протеини при западно блотиране.
- Ютното попиване следва процедурата за прехвърляне на капиляри, от друга страна; Western Blotting следва електрическа процедура за трансфер.
- По време на Южното блотиране, пробата трябва да бъде денатурирана, докато по време на западното попиване пробата трябва да бъде в естественото си състояние.
- Нито една стъпка като блокиране не е замесена в южното попиване от обратната страна, по време на западното блотиране неспецифичните антитела са блокирани върху нитроцелулозната хартия с помощта на мляко на прах или говежди серумен албумин (BSA).
- Обичайните методи за етикетиране, които се използват в южното блотиране, са използването на хромогенни багрила или радиомаркиране или флуоресцентно етикетиране и др., Докато методите за етикетиране, използвани при западно блотиране, са използването на флуоресцентно белязано антитяло или радиомаркиране, хромогенни багрила или образуване на диаминобензидин и др.
- Откриването на светлина, авторадиографията и промените в цвета се използват като методи за откриване при южно печене, докато методите за откриване при западното петно са промени в цвета и откриване на светлина и др.
- Южното блотиране се използва при откриване на ДНК, тестване на бащинство, фиксиране на ДНК, за идентификация на жертви, за идентифициране на престъпници, за намиране на инфекциозни агенти и за идентифициране на мутация или пренареждане на гени и др. Обратно, западното блотиране се използва за намиране на броя на протеина в смес, за откриване на наличие на ХИВ, вирус и бактерии и др. в серума, за откриване на дефектни протеини и се използва като определена мярка за херпес, хепатит В, лаймска болест и болест на Кройцфелд-Яков и др.
заключение
По-горе дискусията обобщава, че южното блотиране е най-старата блотинг техника, използвана за откриване на специфичен ДНК сегмент в проба, докато западното блотиране е открито последно и се използва за идентифициране на специфична последователност на аминокиселини или специфичен протеин.
